|
 五、菌落总数测试片使用说明
1、原理及适用范围
菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。
菌落总数测试片（FilmplateTM Aerobic count plate BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。
本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。
执行标准：食品卫生微生物学检验菌落总数测定——PetrifilmTM测试片法（GB/T 4789.2-2008 ）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。
3、结果判读
细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。
4、计数原则及报告方式
4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。
4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:
式中：
N——样品中菌落数；
∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；
n1——第一个适宜稀释度测试片数；
n2——第二个适宜稀释度测试片数；
d——稀释因子(第一稀释度)。
示例:
|
稀释度 |
1：100（第一稀释度） |
1：1000（第二稀释度） |
|
菌落数 |
232，244 |
33，35 |
上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于300，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.5、若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分小于30或大于300，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.7、菌落总数的报告
4.7.1、菌落总数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
4.7.2、大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。
4.7.4、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
4.7.5、称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
5、表面取样方法
加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上，至少静置5min，使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。
6、附加说明
6.1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。
6.2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3、生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入红外线消毒柜中消毒。
六、饮用水大肠菌群检验纸片使用说明（五管法）
1、适用范围
本产品适用于出厂成品水或直接饮用的矿泉水和纯净水中总大肠菌群的快速检验。
2、方法原理
将乳糖、显色剂和选择性培养基加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。
执行标准：生活饮用水卫生标准（GB 5749—2006）。
3、操作方法
3.1、用灭菌吸管吸取10mL水样加入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共做5个重复；
3.2、将接种好的纸片放于培养箱中，培养温度为36℃±1℃，培养15～24h观察结果。
4、结果判读
4.1、若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性，纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点但周围没有黄晕均为大肠菌群阴性。
4.2、根据每个稀释度的阳性反应纸片数，查MPN表可得出水样中总大肠菌群的MPN值（见表1）。如所有纸片均为阴性时，可报告总大肠菌群未检出。
4.3、对于阳性纸片，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。用接种环在阳性菌斑处沾取少许带菌滤纸，用3mL灭菌生理盐水混匀，接种到大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片上，进行44.5℃培养和检验。
表1 用5份 10mL水样时各种阳性和阴性结果
组合时的最可能数（MPN）及95%可信限
阳性纸片数 |
最可能数（MPN/100mL） |
95%可信限 |
|
下限 |
上限 |
|
0 |
0 |
0 |
6.0 |
|
1 |
2.2 |
0.1 |
12.6 |
|
2 |
5.1 |
0.5 |
19.2 |
|
3 |
9.2 |
1.6 |
29.4 |
|
4 |
16.0 |
3.3 |
52.9 |
|
5 |
>16 |
8.0 |
无限 |
七、水质大肠菌群检验纸片使用说明（十五管法）
1、适用范围
适用于水源水、生活饮用水和其他水样中大肠菌群的快速计数。
2、方法原理
将乳糖胆盐选择性培养基和TTC显色剂加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。
执行标准：生活饮用水卫生标准（GB/T 5749—2006）；生活饮用水标准检验方法（GB/T 5750.12-2006）。
3、方法特点
与国标法中的十五管法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由78h缩短为24h以内，省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以打开包装进行抽样检测。
4、操作方法
4.1、接种：用灭菌吸管吸取10mL水样插入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共做5个重复；分别取1mL水样加到小纸片中，共接5个重复；另取1mL水样加到9mL灭菌生理盐水中混匀，用1mL灭菌吸管分别吸取1mL（即0.1mL水样），加到最后5片小纸片中。
4.2、培养：将接种好的纸片放于培养箱中，36℃±1℃培养15～24h。
5、结果判读
观察每片颜色变化，若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性，若纸片保持紫蓝色不变或在紫蓝色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄色均为大肠菌群阴性。
6、结果报告
根据阳性反应纸片数，查MPN表可得出水样中大肠菌群的MPN值。如水样污染严重含菌量较多，可将水样稀释成10-1和10-2再加到纸片上，即实际水样加量为1mL、0.1mL、0.01mL水样，其实际MPN值乘以10，以此类推。
6.1、列举说明
假设检验15张纸片阳性数分别为5-3-1，那么查水质大肠菌群MPN检索表可知，大肠菌群的MPN值为每100mL水样中110，如果接种量为1mL、0.1mL、0.01mL时，MPN值为1100。
八、总大肠菌群检测试剂盒使用说明
1、适用范围
适用于二次供水、自来水、水源水、生活饮用水、矿泉水等样品中总大肠菌群检测。对污染较严重的样品采用十五管法，其它可采用五管检测法。
2、方法原理
与国标法相同。事先将乳糖蛋白胨培养基双料、乳糖蛋白胨培养基单料浓缩至试剂盒培养孔中，随时取用。
3、操作方法
3.1、十五管法：用无菌吸管吸取5个10mL水样分别加入到试剂盒1号～5号5个大发酵培养基孔内。吸取5个1mL水样分别加入到试剂盒7号～11号5个小发酵培养基孔内。吸取5个用灭菌生理盐水稀释后的1:10稀释液1mL加入到试剂盒12号～16号小发酵培养基孔内。余孔可做对照。
3.2、五管法: 用无菌吸管吸取5个10mL水样分别加入到试剂盒1号～5号5个大发酵培养基管（孔）内。余孔可做对照。
3.3、排气泡: 加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜使气泡排出，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数次排出气泡。
3.4、培养：将加样后的试剂盒置36℃± 1℃温箱中，培养18h～24h。
3.5、观察结果：样液变为黄色为产酸、集气窗中有气泡为产气，产酸产气者为阳性结果，可根据试剂盒的阳性管数,参照国标GB/T5750.12-2006的方法，查表 MPN检索表（表2或 表3），报告每100mL水样中的总大肠菌群最可能数。如需对阳性结果进一步证实，可参考GB/T5750.12-2006方法进行。如所有管数均为阴性时，可报告总大肠菌群未检出。
4、 注意事项
4.1、加入样品后不需摇匀，平拿平放。
4.2、加样时可用一次性无菌塑料吸管，将样品稀释液加至试剂盒所标刻度处。
4.3、在培养箱中取试剂盒时应平托出来，不要倾斜以免由于试剂盒的倾斜将阳性管集气窗中的气泡排出而影响结果。
4.4、试剂盒为一次性无菌用品，供一次性使用。
表3 十五管法总大肠菌群（MPN）检索表
（总接种量55.5 mL，其中5份10 mL水样，5份1mL水样，5份0.1 mL水样）
接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
|
0
0
0
0
0
0 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
<2
2
4
5
7
9 |
1
1
1
1
1
1 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
2
4
6
8
10
12 |
|
0
0
0
0
0
0 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
2
4
6
7
9
11 |
1
1
1
1
1
1 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
4
6
8
10
12
14 |
|
0
0
0
0
0
0 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
4
6
7
9
11
13 |
1
1
1
1
1
1 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
6
8
10
12
15
17 |
|
0
0
0
0
0
0 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
6
7
9
11
13
15 |
1
1
1
1
1
1 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
8
10
12
15
17
19 |
|
0
0
0
0
0
0 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
8
9
11
13
15
17 |
1
1
1
1
1
1 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
11
13
15
17
19
22 |
|
0
0
0
0
0
0 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
9
11
13
15
17
19 |
1
1
1
1
1
1 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
13
15
17
19
22
24 |
| 接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
|
2
2
2
2
2
2 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
5
7
9
12
14
16 |
3
3
3
3
3
3 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
8
11
13
16
20
23 |
|
2
2
2
2
2
2 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
7
9
12
14
17
19 |
3
3
3
3
3
3 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
11
14
17
20
23
27 |
|
2
2
2
2
2
2 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
9
12
14
17
19
22 |
3
3
3
3
3
3 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
14
17
20
24
27
31 |
|
2
2
2
2
2
2 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
12
14
17
20
22
25 |
3
3
3
3
3
3 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
17
21
24
28
32
36 |
|
2
2
2
2
2
2 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
15
17
20
23
25
28 |
3
3
3
3
3
3 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
21
24
28
32
36
40 |
|
2
2
2
2
2
2 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
17
20
23
26
29
32 |
3
3
3
3
3
3 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
25
29
32
37
41
45 |
|
接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
接种量，mL |
总大肠菌群
（MPN/100mL） |
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
|
4
4
4
4
4
4 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
13
17
21
25
30
36 |
5
5
5
5
5
5 |
0
0
0
0
0
0 |
0
1
2
3
4
5 |
23
31
43
58
76
95 |
|
4
4
4
4
4
4 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
17
21
26
31
36
42 |
5
5
5
5
5
5 |
1
1
1
1
1
1 |
0
1
2
3
4
5 |
33
46
63
84
110
130 |
|
4
4
4
4
4
4 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
22
26
32
38
44
50 |
5
5
5
5
5
5 |
2
2
2
2
2
2 |
0
1
2
3
4
5 |
49
70
94
120
150
180 |
|
4
4
4
4
4
4 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
27
33
39
45
52
59 |
5
5
5
5
5
5 |
3
3
3
3
3
3 |
0
1
2
3
4
5 |
79
110
140
180
210
250 |
|
4
4
4
4
4
4 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
34
40
47
54
62
69 |
5
5
5
5
5
5 |
4
4
4
4
4
4 |
0
1
2
3
4
5 |
130
170
220
280
350
430 |
|
4
4
4
4
4
4 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
41
48
56
64
72
81 |
5
5
5
5
5
5 |
5
5
5
5
5
5 |
0
1
2
3
4
5 |
240
350
540
920
1600
＞1600 |
九、 大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片使用说明
1、原理及适用范围
根据国家生活饮用水卫生标准，当水样检出总大肠菌群时，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群；如果水样未检出总大肠菌群，则没有必要进行大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群的检验。
大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片（FilmplateTM E.coli&thermotolerant coliformbacteria count plate BE213）运用酶底物技术，含有大肠埃希氏菌特有葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的显色底物(XGLUC/blue)，以及耐热大肠菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的显色底物（SalmonGal/red）, 经过44.5℃培养后，大肠埃希氏菌显蓝色，紫红色或蓝色菌斑都属耐热大肠菌群。
执行标准：生活饮用水卫生标准（GB 5749—2006）。
本产品适用于各种水样中大肠埃希氏菌和耐热大肠菌群的快速检测。
2、操作方法
2.1、对于大肠菌群检验显示阳性的纸片或产酸产气的发酵管，用接种环挑取菌液，转入2～3mL无菌磷酸缓冲液（或生理盐水）中混匀，用灭菌吸管吸取1mL慢慢均匀地滴加到大肠埃希氏菌耐热大肠菌群测试片上，然后放下上层膜，静置10s左右使培养基凝固。
2.2、将接种好的测试片叠在一起放回到原来的自封袋中，并封口，透明面朝上水平放于培养箱中，堆叠片数不得超过12片，44.5℃培养15～24h观察结果。
3、结果判读
测试片上出现紫红色或蓝色菌斑都是耐热大肠菌群阳性，其中蓝色为大肠埃希氏菌阳性。没有紫红色或蓝色斑点为阴性结果。
4、附加说明
耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms）是总大肠菌群的一部分，将培养温度提高到44～45℃，在此条件下仍能生长和发酵乳糖的菌群被称为耐热大肠菌群。它们由埃希氏菌属以及克雷伯菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属中的一些菌种组成。其中大肠埃希氏菌(E.coli) 是最准确和专一的粪便污染指示菌。与总大肠菌群相比，耐热大肠菌群在水体中的检出，说明水体更为不清洁，存在肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。
十、 沙门氏菌测试片使用说明
1、原理及适用范围
沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒、导致肠胃炎、伤寒和副伤寒的细菌。能引起食物传播性疾病，近年来，已经成为最常见的食物中毒原因。肠炎沙门氏菌感染通常源于奶制品、禽产品和肉产品；鸡肉和鸡蛋尤其是高风险食品。沙门氏菌感染的症状通常是肠胃出现问题，包括恶心、腹部绞痛、呕吐和腹泻，一般最多持续7天。在免疫力低下的人群中，如果不及时服用抗生素类药品，沙门氏菌感染将导致生命危险。
沙门氏菌测试片（FilmplateTM Salmonella test plate BS205）含有选择性培养基、沙门氏菌特有辛酯酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否带有沙门氏菌，非常适合各级检验部门和食品企业使用。
本产品适用于肉和肉产品、蛋及蛋制品、冷饮等的快速检测。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。
2.2、接种：将沙门氏菌测试片（BS205）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个样品接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口。透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
对测试片进行观察，呈紫红色的菌落为沙门氏菌；呈蓝色的菌落为其他菌群。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、结果报告
在25mL（或25g）样品中检出或未检出沙门氏菌。
5、附加说明
5.1、有关验证试验表明，接纯菌种（包括硫化氢阴性菌株）可以产生典型的紫红色菌斑，其他肠杆菌呈蓝色，葡萄球菌不生长。
5.2、测试片具有较强的敏感性，在1.5×10-8稀释度时仍可计算出菌落。临床实际应用结果显示阳性检出率高于分离培养法1.84‰，复查准确率提高约13.0%（中国卫生检验杂志2006,16（8）：954-955）。
5.3、阳性确认试验推荐使用氧化酶试纸法，具体操作是：选择测试片上可疑的沙门氏菌菌落，在对应上盖膜上做好标记并编号。将氧化酶试纸贴在可疑菌落上，盖上上盖膜等待30s左右，如果氧化酶试纸颜色不变则为氧化酶阴性，可以报告25g样品沙门氏菌阳性，反之，试纸片变红，则氧化酶阳性，报告25g被检样品沙门氏菌阴性。
5.4、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
十一、金黄色葡萄球菌测试片使用说明
1、原理及适用范围
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 简称金葡菌)是人类最常见的致病菌之一，其侵袭力很强，能产生多种致病物质如：肠毒素、凝固酶等；可引起化脓性炎症、毒素性疾病及葡萄球菌性肠炎。金葡菌所引起的中毒事件已成为世界性的公共卫生问题，我国每年由金葡菌引起的食物中毒事件屡有报道。
金黄色葡萄球菌测试片(FilmplateTM Staphylococcus aureus test plate BT206) 含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序。
本产品适用于各类生、熟食制品，饮料，糕点类，调味品，奶制品等的快速检测。
执行标准：食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌计数——PetrifilmTM 测试片法（GB/T 4789.37—2008）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，调节样品匀液pH至6.0～8.0。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，将金黄色葡萄球菌测试片（BT206）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片。做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
培养后，测试片上紫红色的菌落为金黄色葡萄球菌；呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、计数原则及报告方式
通常选择菌落数在15～150之间的稀释度，两张测试片菌落平均数乘以稀释倍数，即为每毫升（或克）样品中金黄色葡萄球菌数，以CFU／mL或（CFU／g）表示。详细可参考大肠杆菌大肠菌群测试片（BE203）的计数原则。
5、附加说明
5.1、本产品对于提高卫生行政监督部门应对细菌性食物中毒等突发性公共卫生事件的能力，具有重要的作用。
5.2、山东省疾病预防控制中心的验证结果表明，当金黄色葡萄球菌在0～9个菌落范围内时，测试片与血平板均能检出，作为致病菌不得检出的标准要求，可以作为金黄色葡萄球菌检验应用。
5.3、经试验，该测试片的检测灵敏度高，特异性强，重复性好。对纯菌的检测下限可达3cfu／mL，与营养琼脂计数、Baird-Parker培养计数和显色培养基计数比较，检测结果均无显著差异。（食品研究与开发2009，30（1）：94-97）
5.4、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
十二、副溶血弧菌测试片使用说明
1、原理及适用范围
副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌，海产品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的重要病原。据国家食源性疾病监测网统计，我国近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈显著上升趋势，已成为我国一个严重的食源性公共卫生问题之一。该菌引起的食物中毒临床上表现为：上腹部疼痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等，腹泻多为水样便，亦有大便脓血，随后腹部剧烈疼痛，持续1～2天。
副溶血弧菌测试片(FilmplateTM Vibrio parahaemolyticus test plate BH209)是一种商品化的一次性培养基产品，含有高选择性培养基、吸水凝胶和特异酶指示剂等重要成分，培养15～24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序，更加适合卫生监督检验部门和食品生产加工企业使用。
本产品适用于水产品、海产品及其腌、熟制品、水产调味品等的快速检测。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌3.5%氯化钠水溶液的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。
2.2、接种：将副溶血弧菌测试片(BH209)置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液缓慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固。每个样品接种两片，同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
呈紫色的菌落为副溶血弧菌。多数非目的菌在测试片上不生长，少数能生长，如创伤弧菌和霍乱弧菌，但菌落呈蓝色，明显区别于目的菌。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、报告方式
在25g（或25ml）样品中检出或未检出副溶血性弧菌。
5、附加说明
5.1、根据出入境检验检疫局技术中心所做的对比试验结果表明，副溶血弧菌测试片具有较高的检测灵敏度和准确性，对纯菌的检测灵敏度达到8cfu/mL，与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准（SN）方法符合率达到90%以上（中国卫生检验杂志2008，18（12）：2621-2623）。
5.2、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
十三、大肠杆菌O157测试片使用说明
1、原理及适用范围
肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。
大肠杆菌O157测试片（FilmplateTM E.coli O157 test plate BO204）采用进口高选择性显色培养基作为主要原料，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认，大大地简化了检测程序，非常适合各级检验部门和食品企业使用。
本品适用于海产品、水产品、各类熟肉制品和冷荤、蛋及蛋制品等的快速检测。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。
2.2、接种：将大肠杆菌O157测试片（BO204）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液缓慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3 、结果判读
对测试片进行观察，呈紫红色的菌落为大肠杆菌O157；呈蓝色的菌落为其他大肠菌群。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、报告方式
报告每25g（或25ml）样品中检出或未检出大肠杆菌O157。
5、附加说明
5.1、本品所用培养基已在国外得到比较广泛的应用，有关验证试验表明，接纯菌种可以产生典型的紫红色菌斑，准确率达到98%（K.A. Bettelheim. 1998. J. Clin. Microbiol.85：425-428）。
5.2、经本公司检测，大肠杆菌O157测试片对纯菌的检测灵敏度为1 cfu/mL。
5.3、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
十四、阪崎肠杆菌测试片使用说明
1、原理及适用范围
阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii )存在于肠道中，在一定条件下可引起人和动物致病。能引起新生儿脑膜炎、致死性小肠结肠炎和菌血症等疾病，且伴随有严重的神经系统后遗症、发育障碍等症状，引起的死亡率高达50％以上。新生儿阪崎肠杆菌感染与婴儿配方奶粉密切相关，奶粉中微量的阪崎肠杆菌污染也能导致感染的发生。
阪崎肠杆菌测试片（FilmplateTM Enterobacter sakazaii test plate BQ208）是一种预先制备好的一次性培养基产品，由阪崎肠杆菌选择性培养基、吸水凝胶和特异性酶显色剂等组成，简化了检测程序，更加适合各级检验部门和食品生产企业使用。本产品适用于奶粉、牛奶及奶制品的快速检测。
参照标准：食品卫生微生物检验阪崎肠杆菌检验（GB/T4789.40-2008）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品100mL（g），加入已预热至44℃装有900mL专用增菌液的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃，增菌培养6-8h。
2.2、接种：将阪崎肠杆菌测试片（BQ208）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL经过增菌的样品液，慢慢均匀地滴加到中央滤纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s使培养基凝固，每个样品接种两片。做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
对测试片进行观察，呈蓝绿色的菌落为阪崎肠杆菌，为阳性结果；无任何点为阴性结果。出现阳性菌落的样本，最好用其他更为可靠的方法进行验证，没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、结果报告
在100mL（或100g ）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
5、附加说明
5.1 、经过试验，测试片具有很好的特异性，接种阪崎肠杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点，接种一些肠道菌如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌等时，一加样下去就会出现有紫色的点或晕状，此为产品本身显色剂的原因，不影响产品的使用和结果判读；而金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157和副溶血弧菌等均被抑制。
5.2 、多次试验结果阪崎肠杆菌测试片对纯菌的最低检测限为4cfu/mL，与平皿法的符合率均在80％以上。
5.3 、专用增菌液的配制和灭菌：取一包专用增菌培养基粉，倒入1000mL的三角锥瓶中，加入900mL纯净水，加塞后加热至沸，保持20分钟，冷却后当天使用。有条件可采用高压灭菌。
5.4 、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
十五、蜡样芽胞杆菌测试片使用说明
1、原理及适用范围
蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）在自然界分布广泛，在各种食品中的检出率也较高，往往是食品在食用前保存温度不当，放置时间过长，使污染在食品中的蜡样芽孢杆菌或残存的芽孢得以生长繁殖，或是由于含有蜡样芽孢杆菌产生的热稳定毒素，而导致食物中毒的发生。中毒的发病率较高，一般为60%～100%。
蜡样芽孢杆菌测试片(FilmplateTM Bacillus cereus test plate BL210)是一种商品化的一次性培养基产品，由选择性培养基、高分子吸水凝胶和专一性酶指示剂等构成，一步培养显色就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序，对于提高细菌性食物中毒突发事件的反应能力具有重要的作用，同时也可在食品生产企业使用。
本产品适用于乳制品、肉类、淀粉类食品、各种甜点等的快速检测。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种：将蜡样芽孢杆菌测试片(BL210)置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管每个梯度各取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右，使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。
3、结果判读
对测试片进行观察，呈蓝绿色的菌落为蜡样芽孢杆菌。对于出现阳性菌落的样品，最好用其他方法作进一步的鉴定。
4、附加说明
4.1、本产品具有很好的特异性，接种蜡样芽孢杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点，而大部分非目标菌如大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌和阪崎肠杆菌等均被抑制。
4.2、初步试验表明，蜡样芽孢杆菌测试片对纯菌的最低检测限为1cfu/mL。用蜡样芽孢杆菌测试片检测了23种食品样品，同时接种平皿做对比试验。测试片检出阳性样品7个，检出率为30.4％；用平皿法检出阳性样品6个，检出率为26.1％，测试片法比平皿法高了4.3％。
4.3、注意使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。
十六、致病菌增菌检测试剂盒使用说明
1、适用范围
本品适用于食品及水中致病性沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、致泻大肠埃希氏菌（含肠出血性大肠杆菌O157:H7）、蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌检测的前期增菌实验观察以及大肠菌群污染程度的检测。
2、方法原理
依据国标GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技术将相对应培养基包被在试剂盒底部，随时取用。
3、样品稀释
同国标法。液体样品取原液。固体或半固体样品用灭菌生理盐水配制成1:10和1:100的稀释液。
4、致病菌检测
4.1、加样：用灭菌吸管吸取原液或1:10样品稀释液4ml～10 ml（不得少于4ml）分别加入到标号为1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）内。加样后的1、2、3号分别为副溶血弧菌、致泻大肠埃希菌、阪崎肠杆菌增菌液；A、B、C分别为金黄色葡萄球菌、沙门菌、蜡样芽孢杆菌增菌液。
4.2、 培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养6～18小时。
4.3 、观察结果：如果某致病菌的增菌液发生浑浊，即预示含有此种致病菌。条件具备的话，可按国标法进一步检测。
5 、大肠菌检测
5.1 、加样：将试剂盒放在试验台面上，打开盒盖，用灭菌吸管分别吸取3个原液或1:10样品稀释液1ml加到标号为4、5、6的小培养基孔内。另用灭菌吸管分别吸取3个1:10或1:100的样品稀释液1ml加到标号为7、8、9的小培养基孔内，标号为10的小培养基孔内可加入1ml灭菌生理盐水作为培养基阴性对照孔使用。
5.2 、排气泡：加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜使气泡排出，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下排出气泡。
5.3 、培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养18～24小时。
5.4 、观察结果：样液变为黄色为产酸、集气窗中有气泡为产气，产酸产气者为阳性结果，阳性结果的孔数越多，说明污染越严重。
6、注意事项
6.1、致病菌检测与大肠菌检测可同时进行；加入样品后不需摇匀；大肠菌检测培养前一定要排气泡，在培养箱中取试剂盒时注意平托出来，避免由于试剂盒的倾斜使大肠菌阳性集气窗中的气泡流失而影响结果判断。
6.2、试剂盒为一次性无菌包装用品，供一次性即开即用，。
7、保存条件和有效期
避光保存于阴凉干燥处，最佳温度为2～8℃，有效期18个月。 | 
